實驗室薄層層析板制作及使用經(jīng)驗
關(guān)于配制CMC-Na：
1.先將稱好的CMC加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,在加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時間短.
2.CMC溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實際操作中0.4％-0.5％最為實用，濃度高了將來顯色時如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了鋪出來的板子不結(jié)實，輕輕一碰就掉渣，不好保存，而且點樣時會很緊張，容易出洞.
3.0.5%CMC-Na與水浴溶漲至充分?jǐn)嚢枞軡q，如果不好溶漲，可在溶脹前加幾滴乙醇，比較好溶，但是盡量不加，因為加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。充分溶脹后，用脫脂棉墊到布氏漏斗上抽濾。封口冷藏待用。
4.（1）CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兌，否則，幾天以后就會變綠，起霉。注意放置時間太長的CMC-Na溶液可能會發(fā)黃，而且可能有霉菌出現(xiàn)，絕對不能再使用。
（2）如果有抽濾裝置你可以直接把CMC-Na溶液濾過，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子），還有兩個好處一是節(jié)省CMC-Na溶液，二是倒濾過的CMC-Na溶液的時候不必?fù)?dān)心會把下層的不溶物倒出來了�。┯袀�辦法過濾CMC溶液，在布氏漏斗上平鋪薄薄一層脫脂棉，千萬保證每個小孔都沒漏掉哦！用蒸餾水潤濕脫脂棉，啟動真空泵，抽緊后就可以放心大膽的倒CMC溶液了，保證濾過的溶液澄清透明，而且長時間放置不沉淀。
5.CMC-Na是一種高分子材料,而高分子材料的溶解必然都會有一個溶脹,溶解的過程,所以配制的時候,應(yīng)該將稱好的CMC-Na少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開平鋪,這樣能夠充分浸潤,使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解,當(dāng)然如果你不是很急著用的話也完全可以,直接用水泡著放那,估計十天半月的也可以用了.
6.CMC-Na的配制，大家也說了很多，我只是想說一下在CMC-Na的溶解過程中，可以使用可進行加熱操作的磁力攪拌器，大概攪拌5小時，應(yīng)該可得到滿意的效果。而且這樣就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清。CMC-Na后處理，很多人說是過濾，或者抽濾，我覺得可能速度很慢，而且又容易浪費。我的做法是離心，5000rpm離心20min。倒出上清液，（非常清，也同時消除了過濾過程中可能發(fā)生的污染。）更難能可貴的是，我可以收集下面沒有充分溶解的CMC-Na。繼續(xù)加到水中，還可以配制�。『螛范粸槟�？
7.鋪CMC-Na的薄層板,先將CMC-Na溶解完全,可將溶解成所需濃度加熱后超聲處理,再抽濾,可很快得到上清液
關(guān)于薄層板的要求：
1.載板要求平滑清潔，沒有劃痕，在使用前可用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈，涼干。
2. 怎么樣的玻璃算是干凈：就是用洗潔精浸泡也好，用酸浸泡也好，當(dāng)你覺得洗干凈的時候，拿在手上立起來，如果發(fā)現(xiàn)水不是呈股流下，而是呈瀑布狀態(tài)流下，那么說明你的玻璃已經(jīng)洗干凈了。其實真正洗干凈的玻璃，很快就可以晾干的。
3．鋪制薄層板要求玻璃板干凈、整潔、不掛水珠的。建議用燒堿溶液浸泡。如果還解決不了那就只好放棄這塊玻璃板了。
關(guān)于研磨及鋪板要求：
1. 取薄層層析硅膠重量與CMC-Na的體積比為1：4的比例（該比例能使硅膠板鋪出的效果較好不至于掉渣也不至于板太硬）充分混合碾磨，至拿起碾錘能看到混合液與碾錘有一定的粘連。即好。薄層板一定要光滑無油污，取一定量的溶液置板上，用薄棒引導(dǎo)使其鋪滿板面，一手托起硅膠板另一手在下輕輕敲，轉(zhuǎn)動板子均勻的敲勻。
2. 硅膠的研磨，當(dāng)然是一個方向了，可以適量的加入一定量的無水乙醇或丙酮來消泡，可以適當(dāng)攪拌后放在干凈容器內(nèi)超聲，效果都是不錯的。手工鋪硅膠的用量一般10*20的約3-4克，硅膠和CMC-Na的用量一般是1：2.8-3，具體根據(jù)要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。
3．依據(jù)薄層板使用需要，將適量研好的吸附劑倒到薄層板上，先用小錘將吸附劑蕩勻，傾斜層析板，使吸附劑流至層析板一側(cè)，待吸附劑蓄積一定量后，再反向傾斜層析板，使吸附劑回流；然后是另外兩個方向，重復(fù)上述操作，后輕顛幾下薄層板即可。
4. 將載玻片置于平臺上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片表面。鋪板時，可以順著板中間倒，也可以順著某個邊緣倒，也可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上，倒時也要注意不要引入小氣泡。如有需要，可以雙手10個指頭托住玻璃板，有節(jié)奏的顛簸，使得糊狀硅膠分布勻稱。尤其是載板的四個角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒有氣孔。薄層板鋪好后一定要放置在平的臺面上，否則難保證板面硅膠的厚度均勻。
5. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開鼓風(fēng)干燥30分鐘,再升溫干燥至干,注意升溫過快在使用的過程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象不利于分離。
6. 10g吸附劑加入3滴95％乙醇以驅(qū)趕氣泡；
關(guān)于展開劑：
分離的樣品酸性比較大，一般在展開劑中加酸
1.加甲酸是因為該樣品是酸性的，加酸的量和該物質(zhì)的酸性成正比關(guān)系，加水可能是因為你的樣品是苷類的用酸水做一下緩沖，目的就是讓斑點圓滑，不脫尾，展距良好。
2.飽和也非常重要，邊緣效應(yīng)很嚴(yán)重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會好一些
3.1)在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性；
2)以展開劑邊緣效應(yīng)的大小，確定展開劑平衡時間的長短，一般平衡時間在30分鐘即可。
4.有機溶劑的極性，甲醇>氯仿，因此在氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6）這個展開劑中，如果極性略大，可適當(dāng)降低甲醇比例；如極性太小，可適當(dāng)增大甲醇比例。
氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 極性肯定是相同的，這有問題嗎？
另外還有一個問題，這個展開劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。
5.不同的展開系統(tǒng)意思是其中至少應(yīng)該有一種溶劑不同（最好是不同分類組的溶劑）。而不是比例不同�；蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ�。
關(guān)于展開：
1.TLC中樣品拖尾現(xiàn)象是什么原因?該如何解決?
2.TLC中樣品跑成幾乎為一條線,斑點沒有清晰的分離,想請教一下這是什么原因造成的?一般情況下該如何解決?
原因基本相同：
a、對于一些具有酸堿性的化學(xué)成分，在溶液中部分電離，事實上展開時存在分子、離子兩種狀態(tài)，以中性的有機試劑展開必然會出現(xiàn)兩種層析行為，造成脫尾甚至是一條線。
b、展開劑選擇不當(dāng)
c、點樣量過大，樣品超載
解決辦法：
a、在展開劑中加幾滴甲酸或冰醋酸；
b、展開時以氨水飽和
c、減少點樣量
d、參考文獻，調(diào)整展開劑種類、比例
關(guān)于顯色：
1.在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，后改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。
2. “0.5%的板加熱時間長了就會黑”，是在層析完，顯色后吧，我也遇到過同樣的情況，這只有嚴(yán)格控制加熱顯色的時間。
這個問題應(yīng)該是這樣回答：但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，若改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，但不加CMC輔的板又太軟，點樣時容易點出洞，有個好辦法是將CMC的濃度調(diào)至0.1%，這樣就不易烘黑的。
3.關(guān)于薄層板加熱變黑的問題，其實很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了，可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了。實驗室里一般都采用此法，簡便、快捷。如果一非想使用烘箱烘的話，一定要用帶玻璃窗的，當(dāng)看到顯色了就取出，不然不好控制顯色時間，時間過長，ＣＭＣ容易碳化變黑
4。各位樓主真是經(jīng)驗豐富，我鋪的0.5%的板加熱時間長了就會黑，有什么好著嗎？
根據(jù)我的經(jīng)驗，薄層版變黑與CMC－Na的濃度過大有關(guān)，如果你留意的話，你會發(fā)現(xiàn)，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時，加熱時間稍長就會變黑（其他顯色劑是沒事的），我老師說這是因為濃硫酸把CMC－Na炭化了，其實[color=blue=這種情況你只要適當(dāng)降低CMC-Na的濃度[/color]就可以了，當(dāng)然如果不加CMC-Na的話容易把板弄破。一般我都是顯色后用電吹風(fēng)吹的，要均勻吹，電吹風(fēng)離板的距離要遠(yuǎn)些，防止部分會黑。
另還要注意顯色劑，如果顯色劑中含有硫酸，加熱時間一定要掌握好，不可太長。
關(guān)于裂板：
1.板子會裂口，一則可能是因為硅膠的比例太大，二則可能是，板子要在常溫下晾干后，再在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的。
2.“晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。”
你的板沒有完全干透，表面看是干了，但是最中間的沒有干，所以你直接放入105度的烘箱烘，當(dāng)然會炸裂了，所以應(yīng)該先用低溫大約40度左右烘30分鐘左右，再用105度活化，就可以解決這個問題了。
3.關(guān)于活化出現(xiàn)裂板、爆板的問題�；罨瘯r不要等到溫度達到100度，而是設(shè)好溫度后就將板子放在干燥箱，然后再通電加熱，達到最高溫度后停留5分鐘左右即可。這樣水分是慢慢由內(nèi)而外散發(fā)，而不是由外向內(nèi)散發(fā)，避免了表面成膜，里面還在散發(fā)水氣。
關(guān)于點樣：
1．點樣我本人沒有什么技巧，就是在點樣時食指放在點樣管的上端，當(dāng)點樣管的下端與硅膠板接觸的瞬間輕輕松動上端的食指，溶液自然從點樣管出來，迅速提起點樣管，就這樣反復(fù)操作點出的斑點既小又均勻。但要提出樣品溶液不能太濃，濃度太大，點下的樣品不能被硅膠很好的吸收，不利于分離。
2.關(guān)于點樣，我上學(xué)的時候，老師用比較便宜的進樣器（大約10幾塊錢吧，10μl即可），將針尖打磨圓滑，老師好像是用銼一點一點銼的，這樣點樣的時候樣品溶液不容易沿針尖上行（甲醇溶液都這樣），并且針尖不會刺破已經(jīng)鋪好的薄層板。
3. 要磨平微量進樣器的針尖，簡單的方法就是，在展缸的蓋子上輕磨（當(dāng)然是靠近中間部分），就很快能解決問題，且很平滑。
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